
О несовпадениях определения протеина в высокобелковых продуктах:
К сожалению, приходится констатировать тот факт, что на сегодняшний день у потребителя, рассматривая сферу кормопроизводства, нет действенных приемов контроля качества поставляемой продукции производителем кормовых добавок. И иногда даже высокоэффективный продукт, о чем свидетельствуют производственные показатели, опираясь на иногда «косвенные» результаты проведенных испытаний. Одной из наиболее критичных позиций является определение уровня сырого протеина. При определении уровня сырого протеина в продукте, где его значение не превышает 20 %, и в нашей, и в Российских лабораториях несовпадений не бывает. Но как только необходимо произвести исследования в продукте, имеющем высокое содержание протеина, то лаборатории, которые работают по ГОСТ 13496.4, получают на 2-3 % меньше протеина. Причина этого – время минерализации. В ГОСТе 13496.4 написано, что «после того как жидкость осветлиться (...), нагрев продолжают в течение 30 минут». Фактически этого времени достаточно, когда мы говорим о продукции кормопроизводства с содержанием сырого протеина не более 20%, а вот что касается высокобелковых продуктов, то этого времени слишком мало, чтобы минерализация произошла полностью. Раньше мы тоже работали по этому методу и получали заниженные результаты. Теперь мы работаем по методике, подтвержденной министром сельского хозяйства ЛР 2000-06-30 приказом Nо.212, который подготовлен по директивам ЕС. Основа этой методики и ГОСТа 13496.4 та же самая, однако, есть некоторые нюансы следствием несоблюдения которых, и является неверность полученных результатов испытаний касающихся определения сырого протеина. Так теперь я постараюсь вкратце перечесть нюансы, которые мы учитываем при проведении испытаний:
Методика практически аналогична используемой, однако несоблюдение нюансов описанных в примечаниях является одной из наиболее вероятных ошибок ведущей к расхождению между реальным и определяемым уровнем протеина. Примечание 1. Ошибка при определении белка может произойти и из-за вины борной кислоты, особенно в тех случаях, когда холостая проба показывает на отсутствие аммиака. Так о борной кислоте: Изготовление: 400 г борной кислоты растворить в 5-6 л горячей воды, смешать и дополнить водой до около 9 л. Охладить до комнатной температуры и прибавить 100 мл смешанного индикатора. Развести до 10 л дейонизированной водой и хорошо смешать. Корегирование: 25 мл борной кислоты (с индикатором) приливаем в коническую колбу и добавляем 100 мл дейонизированной воды. Если раствор все еще фиолетовый, титруем с раствором NaOH 0,1 M до натурального серого цвета. Подсчитываем, сколько мл NaOH 1,0 M понадобится для коррекции 10 литров борной кислоты: Мл 1,0 М NaOH = мл (титранта NaOH 0,1 M) * 40. Прибавляем подсчитанное количество 1,0 М NaOHв борную кислоту, хорошо смешиваем. Проверяем корегирование отбирая 25 мл борной кислоты (с индикатором) и приливая 100 мл дейонизированной воды. Титруем кислотой (HCl 0,1 M или H2SO4 0,05M). Количество кислоты не должно превышать 1,0 мл (в таких условиях получается неточности). Если превышает 1,0 мл, то в посуду с борной кислотой надо прилить такое количество HCl, что бы на холостую пробу вышло 0,1-0,3 мл HCl 0,1 M. Примечание 2: Количество раствора NaOH 40 % (m/V), то есть 400 г/л, добавляемого для дистилляции, должно соответствовать количеству серной кислоты используемой для минерализации по такой формуле: V NaOH = 4 x V H2SO4 Значит, если для минерализации использовали 12,5 мл H2SO4, то надо наливать 12,5 * 4 =50 мл NaOH 40 % (m/V);а если для минерализации использовали 15 мл H2SO4, то надо наливать 15 * 4 =60 мл NaOH 40 % (m/V). Выполнение этого условия дает гарантию, что весь аммиак освободится из формы (NH4)2SO4 и будет отогнан. Такая вот сводка нашей лабораторной практики и студии процесса Кьелдаля по определению протеина. Надеюсь, что вы обратите внимание на эти нюансы и наши результаты по определению содержания протеина в высокобелковых продуктах не будут иметь расхождений. |