К сожалению, приходится констатировать тот факт, что на сегодняшний день у потребителя, рассматривая сферу кормопроизводства, нет действенных приемов контроля качества поставляемой продукции производителем кормовых добавок. И иногда даже высокоэффективный продукт, о чем свидетельствуют производственные показатели, опираясь на иногда «косвенные» результаты проведенных испытаний. Одной из наиболее критичных позиций является определение уровня сырого протеина.

При определении уровня сырого протеина в продукте, где его значение не превышает 20 %, и в нашей, и в Российских лабораториях несовпадений не бывает. Но как только необходимо произвести исследования в продукте, имеющем высокое содержание протеина, то лаборатории, которые работают по ГОСТ 13496.4, получают на 2-3 % меньше протеина. Причина этого – время минерализации. В ГОСТе 13496.4 написано, что «после того как жидкость осветлиться (...), нагрев продолжают в течение 30 минут». Фактически этого времени достаточно, когда мы говорим о продукции кормопроизводства с содержанием сырого протеина не более 20%, а вот что касается высокобелковых продуктов, то этого времени слишком мало, чтобы минерализация произошла полностью.

Раньше мы тоже работали по этому методу и получали заниженные результаты. Теперь мы работаем по методике, подтвержденной министром сельского хозяйства ЛР 2000-06-30 приказом Nо.212, который подготовлен по директивам ЕС.

Основа этой методики и ГОСТа 13496.4 та же самая, однако, есть некоторые нюансы следствием несоблюдения которых, и является неверность полученных результатов испытаний касающихся определения сырого протеина.

Так теперь я постараюсь вкратце перечесть нюансы, которые мы учитываем при проведении испытаний:

1. В колбу минерализации взвешиваем около 0,5 г высокобелкового сырья (продукта) с точностью не менее 0,001 г (мы взвешиваем с точностью 0,0001 г).
2. Добавляем катализатор  - 7,5 г K₂SO₄ и 0,45-0,6 г CuSO₄ x 5 H₂O (Se уже не используем, потому что он по своей природе является сильным ядом).
3. Приливаем 12,5 мл концентрированной H₂SO₄ (если в пробе высокое содержание жира или углерода – то 15 мл).
4. Минерализуем при температуре 420 ⁰С до осветления минерализата и продолжаем нагрев в течение 2 часов (всего выходит, что общее время составляет не менее 2,5 часов, наблюдая, как скоро минерализат посветлеет).
5. Отгонку аммиака проводим в коническую колбу с 25 мл 4% борной кислоты (примечание 1).
6. В колбу минерализации автоматически наливаем 75 мл дейонизированной воды и 50 (или 60 - примечание 2) мл NaOH 40 % (m/V).
7. Титрование  проводится с кислотой, титр которой выражен с точностью 0,0001.
8. Результаты подсчитываем по той же формуле.

Методика практически аналогична используемой, однако несоблюдение нюансов описанных в примечаниях является одной из наиболее вероятных ошибок ведущей к расхождению между реальным и определяемым уровнем протеина.

Примечание 1. Ошибка при определении белка может произойти и из-за вины борной кислоты, особенно в тех случаях, когда холостая проба показывает на отсутствие аммиака. Так о борной кислоте:

Изготовление: 400 г борной кислоты растворить в 5-6 л горячей воды, смешать и дополнить водой до около 9 л. Охладить до комнатной температуры и прибавить 100 мл  смешанного индикатора. Развести до 10 л дейонизированной водой и хорошо смешать.

Корегирование: 25 мл борной кислоты (с индикатором) приливаем в коническую колбу и добавляем 100 мл дейонизированной воды. Если раствор все еще фиолетовый, титруем с раствором NaOH 0,1 M до натурального серого цвета. Подсчитываем, сколько мл NaOH 1,0 M понадобится для коррекции 10 литров борной кислоты:

Мл 1,0 М NaOH  =  мл (титранта NaOH 0,1 M) *  40.

Прибавляем подсчитанное количество 1,0 М NaOHв борную кислоту, хорошо смешиваем. Проверяем корегирование отбирая 25 мл борной кислоты (с индикатором) и  приливая 100 мл дейонизированной воды. Титруем кислотой (HCl 0,1 M или H₂SO₄ 0,05M). Количество кислоты не должно превышать 1,0 мл (в таких условиях получается неточности). Если превышает 1,0 мл, то в посуду с борной кислотой надо прилить такое количество HCl, что бы на холостую пробу вышло 0,1-0,3 мл HCl 0,1 M.

Примечание 2: Количество раствора NaOH 40 % (m/V), то есть 400 г/л,  добавляемого для дистилляции, должно соответствовать количеству серной кислоты используемой для минерализации по такой формуле:

V _NaOH = 4  x  V _H2SO4

Значит, если для минерализации использовали 12,5 мл H₂SO_4,  то надо наливать 12,5 * 4 =50 мл NaOH 40 % (m/V);а если для минерализации использовали 15 мл H₂SO_4,  то надо наливать 15 * 4 =60 мл NaOH 40 % (m/V).

Выполнение этого условия дает гарантию, что весь аммиак освободится из формы (NH₄)₂SO₄ и будет отогнан.

Такая вот сводка нашей лабораторной практики и студии процесса Кьелдаля по определению протеина. Надеюсь, что вы обратите внимание на эти нюансы и наши результаты по определению содержания протеина в высокобелковых продуктах не будут иметь расхождений.